"Técnicas de tinción".

Tinción de Gram

 Gram negativas


 Gram positivas

Tinción de Gram

Fundamento

Los fundamentos de la técnica se basan en las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas

Característica

Es una técnica de coloración de contraste o diferencial. se utiliza en microbiología para la observación de bacterias, las cuales, con base en la reacción que tengan las paredes de los microorganísmos a los colorantes usados con esta técnica, se les califica en grampositivos y gramnegativos; considerándose bacterias Gram positivas a las bacterias que se aprecian en color violeta y en color rosa bacterias a las Gram negativas.

Aplicaciones

La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiologia para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas.

Usos

Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana.

Técnica

§  Recoger muestras.

§  Hacer el extendido en espiral.

§  Dejar secar a temperatura ambiente.

§  Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado 3 veces aprox.)

§  Agregar azul violeta (cristal violetao violeta de genciana) y esperar 1 min. Todas las células gram positivas y gram negativas se tiñen de color azul-purpura.

§  Enjuagar con agua.

§  Agregar lugoly esperar entre 1 minuto.

§  Enjuagar con agua.

§  Agregar acetona y/o alcohol y esperar 4 segundos (parte critica de la coloracion)

§  Enjuagar con agua.

§  Tinción de contraste agregando safranina o fucsina básica y esperar 1-2 min Este tinte dejará de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.

§  Enjuagar con agua.

Para observar al microscopio óptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión.