Técnicas de tinción

tinción de hematoxilina-eosina

Tinción de hematoxilina-eosina.

Fundamento

La tinción hematoxilina-eosina corresponde a la mezcla de hematoxilinay eosina. La tinción hematoxilina y eosina es uno de los métodos mas populares de tinción utilizado en histología medicina diagnostica.

Características

El método supone la aplicación de la tinción de hematoxilina, que por ser catiónica o básica, tiñe estructuras ácidas (basófilas) en tonos azul y urpura ,como por ejemplo los núcleos celulares; y el uso de eosina que tiñe componentes básicos (acidófilos) en tonos de color rosa, gracias a su naturaleza aniónica o ácida, como el citoplasma.

Uso

Se usa para teñir estructuras acidas y básicas.

Aplicaciones

Se aplica en histología y medicina diagnostica.

Técnica

§  Sumergir los preparados histológicos en xilol para eliminar los excesos de parafina.

§  Luego pasan por una serie de alcoholes (100°. 95° y 70°).

§  Se lava en agua para eliminar exceso de alcohol

§  Se sumerge en hematoxilina por 10 minutos, luego se lava en agua para eliminar excesos y se pasa rápidamente por alcohol ácido.

§  Se lava nuevamente

§  Se sumerge 30 segundos en eosina.

§  Se pasa por otra serie de alcoholes, en orden creciente (70°, 95° y 100°).

§  Finalmente se deja remojar 10 minutos en xilol, antes de realizar el montaje final.

Técnicas de tinción

tinción de Ziehl Neelsen

Fundamento

Se basa en las diferencias de la pared celular existentes entre BGP (pared gruesa) y BGN (pared fina)

Características

Es una técnica de tinción diferencialrápida y económica, para la identificación de microorganismos patógenos, por ejemplo tuberculosis

.

Usos

Se usa para clasificar bacterias u hongos en Gram+ y Gram-; mediante esta clasificación se puede descartar u orientar el diagnóstico de una amplia gama de enfermedades infecciosas

.

Aplicaciones

Se aplica en la identificación de microorganismos patógenos.

Técnica

1.      desparafinar e hidratar los cortes

2.      ácido periódico 5%, 10 min

3.      lavar con agua destilada

4.      fucsina fenicada, 15 min

5.      decolorar en alcohol ácido al 50%

6.      lavar con agua destilada

7.      hematoxilina, 10 min

8.      azulidificar con, por ejemplo, carbonato de litio

9.      deshidratar, aclarar y montar preparaciones

"Técnicas de tinción".

Tinción de Gram

 Gram negativas


 Gram positivas

Tinción de Gram

Fundamento

Los fundamentos de la técnica se basan en las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas

Característica

Es una técnica de coloración de contraste o diferencial. se utiliza en microbiología para la observación de bacterias, las cuales, con base en la reacción que tengan las paredes de los microorganísmos a los colorantes usados con esta técnica, se les califica en grampositivos y gramnegativos; considerándose bacterias Gram positivas a las bacterias que se aprecian en color violeta y en color rosa bacterias a las Gram negativas.

Aplicaciones

La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiologia para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas.

Usos

Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana.

Técnica

§  Recoger muestras.

§  Hacer el extendido en espiral.

§  Dejar secar a temperatura ambiente.

§  Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado 3 veces aprox.)

§  Agregar azul violeta (cristal violetao violeta de genciana) y esperar 1 min. Todas las células gram positivas y gram negativas se tiñen de color azul-purpura.

§  Enjuagar con agua.

§  Agregar lugoly esperar entre 1 minuto.

§  Enjuagar con agua.

§  Agregar acetona y/o alcohol y esperar 4 segundos (parte critica de la coloracion)

§  Enjuagar con agua.

§  Tinción de contraste agregando safranina o fucsina básica y esperar 1-2 min Este tinte dejará de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.

§  Enjuagar con agua.

Para observar al microscopio óptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión.